METABOLISME BACTERIEN

Auteur: JUIZ RÍO SANDRA MARIA.
Année: 2005.
Université: SANTIAGO DE COMPOSTELA [www.usc.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Résumé: Photobacterium damselae est un gamma proteobacteria appartenant à la famille des Vibrionaceae et comprend actuellement deux sous-espèces: P.damselae subsp.piscicida (agent étiologique de la pasteurelosis dans le poisson) et P.damselae subsp.damselae. Parmi les objectifs de cette thèse nous sommes génétiquement caractériser certains des facteurs qui contribuent à la virulence des P.damselae subsp.piscicida, avec un accent spécial sur les systèmes d'achat de fer. Nous avons également analysé la diversité génétique entre les souches de cette sous-espèce, et compte tenu de certaines des différences génétiques entre les souches des deux sous-espèces de P.damselae. Comme point de départ, nous avons identifié le premier gène qui encode une protéine Fur (régulateur de l'absorption ferrique), qui a montré une homologie de séquence de 99,3% entre les deux sous-espèces de P.damselae, différentes protéines est un seul acide aminé dans la 148 consiste . En outre, nous avons montré que Fur agit sur P.damselae comme un régulateur transcriptionnel dépendant de la concentration de fer au milieu. Par ailleurs a été identifié et caractérisé un système pour la capture hemo groupes comme source de fer dans les deux sous-espèces de P.damselae composé de protéines HutA, TonBExbBD, HutBCD et HutWXZ. Ce système a montré haute similitude avec des protéines de systèmes de récolte hemo autres membres de la famille Vibrionaceae, et près de 100% d'identité entre les deux sous-espèces. Toutefois, nous avons remarqué des signes de intraspécifique microevolución dans ce système: le gène récepteur de la membrane externe hutA est interrompu poser un pseudogen dans plusieurs souches piscicida. Curieusement, les seules souches de subsp.piscida possédant le gène hutA intacts constituent un potentiel de la ligne clonale isolats du Japon. Il a également été montré qu'il n'existe pas de systèmes redondants pour capturer hemo, puisque l'inactivation des hutCD s'agit de l'incapacité d'utiliser hemo groupes comme la seule source de fer. Application de la technique d'hybridation Soustractive, nous avons identifié 21 régions du génome d'une souche virulente de piscicida, qui étaient absents à une souche avirulenta. En étudiant la répartition de ces régions de l'ADN dans 28 souches P.damselae subsp.piscicida d'horizons divers et de l'isolement géographique des différents hôtes, il a été constaté que cette question est très hétérogène micro-organisme du point de vue génétique. Nous n'avons pas trouvé de cas dans deux souches présentant exactement le même schéma de distribution des 21 régions analysées. Il ont aussi été identifiés pour la première fois à cet agent pathogène gènes codant transposasas. Ces gènes sont trouvés en plusieurs exemplaires, inséré dans le génome, formant un schéma qui s'est avéré être différent dans chaque souche analysée. En outre, nous avons identifié dans une seule souche de piscicida séquences génétiques similaires à l'élément SXT décrits dans V.cholerae. Cet élément volumineux (environ 100 ko) est représentatif d'une famille de les transposons conjugativos et integrativos qui portent des gènes de résistance à plusieurs antibiotiques. Des études antérieures ont montré que chaque sous-espèce. En P.damselae produit une sideróforo différente. L'application delà Hybridation Soustractive permis à l'isolement et la caractérisation d'une région du génome d'env. 22 ko en subsp.piscicida, qui contient un gène opéron régulée par le fer, y compris un éventuel récepteur membranaire pour sideróforos et 2 pé- 8 ptido - sc 6f4 ntetasas pas ribosómicas (Irp1 et Irp2) de haut poids moléculaire. Ces protéines semblent, en termes de la limitation de préparations à base de fer des membranes totales des souches de subsp.piscicida, étant absent de la souches de subsp.damselae. L'inactivation du gène irp1 il ya insertion qui P.damselae subsp.piscicida pas produit sideróforos et n'est pas en mesure de croître encondiciones la limitation de fer. En outre, la mutation du gène irp1 conduit à une augmentation de la DL 50 dans au moins deux commandes ampleur à l'égard de la souche parentale, ce qui démontre que le système de médiation fer absorption par sideróforos est un facteur contribuant à la virulence des P.damselae sous-espèce . Piscicida dans le poisson. L'analyse de la présence de ces gènes dans une collection de souches a montré que les deux espèces sont uniques à certaines souches de subsp.piscicida. Fait intéressant, les séquences aminoacídicas de la protéine codée par ce opéron enregistrer des taux de similitude avec la synthèse protéique sideróforo yersiniabactinaproducido souches de Yersinia sp, dont les gènes sont regroupés pour constituer une pathogénicité île. Analyse des domaines fonctionnels de protéines Irp1 et Irp2 a fourni la preuve que les sideróforo produite par P.damselae subsp.piscicida peut être structurellement liées yersiniabactina.

Auteur: MORÁN ZORZANO MARÍA TERESA.
Année: 2005.
Université: PÚBLICA DE NAVARRA [www.unavarra.es].
Lieu de l'exposition: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Lieu de préparation: UNIVERSIDAD PÚBLICA DE NAVARRA.

Résumé: L'amidon est le principal moyen de stocker l'énergie dans de nombreuses espèces végétales. Il est un élément essentiel de l'alimentation des êtres humains et est une matière première dans de nombreux processus industriels. Le glycogène à son tour, est la principale forme de stockage d'énergie dans de nombreuses espèces bactériennes. À l'instar de l'amidon est un homopolisacárido molécules de glucose. Ces deux bactéries et des plantes a été généralement accepté que l'ADPglucosa pirofosforilasas est la seule enzyme capable de produire ADPglucosa (ADPG) nécessaire à la biosynthèse de l'amidon et du glycogène. Cependant, notre équipe a accumulé des preuves sur l'existence d'autres sources importantes de ADPG usine. C'est pourquoi j'ai soulevées dans le présent document d'enquêter sur l'existence éventuelle de sources supplémentaires de ADPG dans la production de bactéries. A cette fin, il caractérise les souches d'Escherichia coli et Salmonella enterica mutants dans l'opéron glgCAP dont les produits sont responsables de la synthèse de l'ADPG, leur utilisation pour la synthèse de glycogène et de la dégradation de cette poliglucano. Ce travail, qui fait l'objet du chapitre 1, présente des éléments de preuve montrant que les entérobactéries possèdent plusieurs sources importantes de ADPG. Étant donné que les bactéries accumulation de glycogène peut être déterminée non seulement par la synthèse de l'ADPG mais aussi pour son hydrolyse, je procède à caractériser les aspects réglementaires de l'ADPglucosa pirofosfatasa (AspP) de Escherichia coli. Les premières études présentées dans le chapitre 2 montre que de petites augmentations de l'activité de cette enzyme entraînant une réduction de la teneur de glycogène, en indiquant que, sauf AspP est réglementée, il glycogène s'accumule dans la bactérie. Des études ultérieures ont montré que AspP est très réglementé tant par les effets de la surpopulation macromoléculaires et des mécanismes de translocation membranaire induite par des substances présentes dans les cultures bactériennes saturé. Dans le chapitre 3 décrit l'identification et la caractérisation des protéines bactériennes équivalent à AspP usine. Dans un premier temps d'enquêter sur leur éventuelle implication dans le contrôle des niveaux de ADPG associés à la synthèse de l'amidon, produit et caractericé sur la production de plantes AspP. Les feuilles de ces plantes ont montré une réduction significative des niveaux de l'ADPG comme l'amidon, ce qui indique que l'usine hydro AspP catalyse la rupture d'un bassin de ADPG liée à la synthèse de l'amidon. Enfin, en raison du fait que notre groupe a récemment montré pour la première fois l'existence d'un mécanisme pour la capture endocítica saccharose dans les cellules hétérotrophes, j'ai étudié la possibilité que ce mécanisme est directement impliquée dans le contrôle des niveaux de ADPG et de l'amidon de ces cellules . À cette fin, tels que présentés dans le chapitre 4, j'ai comparé le taux d'accumulation de ces substances dans les cellules en culture sycamora en présence et en l'absence d'inhibiteurs de l'endocytose. La présence d'inhibiteurs conduit à une réduction des niveaux de l'amidon, de saccharose et de ADPG, confirmant que la plupart des apoplástica saccharose est capté par endocytose être converties en ADPG-almidón.

Auteur: JIMÉNEZ ZARCO JOSÉ IGNACIO.
Année: 2005.
Université: COMPLUTENSE DE MADRID [www.ucm.es].
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.

Résumé: La souche de Pseudomonas putida KT2440 est un micro-organisme modèle pour les processus liés à la biodégradation des contaminants dans l'environnement, en plus d'autres applications de la biotechnologie. Dans cette thèse a fait une étude détaillée des gènes impliqués dans la dégradation des voies de composés aromatiques présents dans le génome de la souche KT2440 permettant catabólico déterminer le potentiel global de la bactérie à l'avant de ce type de composés. À cet égard, nous avons identifié cinq voies de dégradation des centrales, pour les métabolites protocatecuato (pca gènes), catéchol (gènes chat), phénylacétate (gènes pha), homogentisato (gènes hmg) et galato (gènes imp). En outre, nous avons identifié les gènes qui codent les routes périphériques de la dégradation p-hydroxybenzoïque, le benzoate de composés fenilpropenopides, quinato, feniletilamina, fenilalcanoatos, fenilacetaldehído, la phénylalanine et la tyrosine. Un autre résultat de l'analyse est d'identifier une nouvelle voie de dégradation de l'acide nicotinique (gènes nique), un composé aromatique N - heterociclo qui, dans sa dégradation génère des métabolites à haute activité biologique utilisé dans la synthèse de produits pharmaceutiques. La caractérisation moléculaire des gènes nique conduit à l'identification de nouvelles enzymes impliquées dans la minéralisation. Dans une première étape implique un nicotinato hydroxylase intervient (NicAB), une hydroxylase intervient dépendent molybdène qui n'avaient pas été précédemment caractérisé, et qui transforme le ácidonicotínico acide 6 - hidroxinicotínico qui est utilisé dans la synthèse des insecticides. Dans une deuxième étape, de 6 hidroxinicotinato hydroxylase intervient (NicC) transforme l'acide 6 - hidroxinicotínico dans l'intermédiaire centrale 2,5 - dihidroxipiridina, qui est utilisée dans la synthèse de l'acide aminolevulínico précurseur de la synthèse des composés anti-tumorale. Le 2,5 - dihidroxipiridina souffre de la perte de aromatiques à l'action de NicX, qui est le premier membre d'une nouvelle famille de dioxigenasas liés aminopeptidasas. Cette réaction génère acide N - formilmaleámico qui se transforment en acide maleámico par l'enzyme NicD, qui est le premier desformilasa décrit sein de la famille des A / B - hidrolasas. Lso ont été également identifiés les gènes nicF et nicE impliqués dans les deux dernières étapes de l'itinéraire, l'obtention d'acide maléique et acide fumarique, IMI, respectivement. Nic gènes sont organisés en trois opérons transcripcionales nicAB, nicXR et nicCDEFTP, qui sont induites par l'acide 6 - hidroxinicotínico, tandis que seul acide nicotinique induit l'expression de l'opéron nicAB. NicR agit comme répresseur de l'expression nicXR et nicCDFTP, tout en servant de induisant l'expression de nicAB.