METABOLISME MICROBIEN

Auteur: ALVAREZ PERAL FRANCISCO JOSÉ.
Année: 2002.
Université: MIGUEL HERNÁNDEZ DE ELCHE [www.umh.es].
Lieu de préparation: ESCUELA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRÓNOMOS.

Résumé: Le genre Candida comprend levure ascomicetáceas pas de véritable cycle sexuel. Ce micro-organisme est une levure commensales l'homme et les animaux homeostermos. Sa définition inclut taxonomiques cellules végétative levaduriformes avec gemación multilatérale sans accouplement. Présente besoins nutritifs relativement simple et peut se développer dans un milieu contenant une source de carbone organique (sucres), une source d'azote (sels d'ammonium), les phosphates et les exigences spécifiques de certains acides aminés et de vitamines (biotine, thiamine). Il pousse bien dans la plage de température inlcuidos entre 20 ° C et 40 ° C, de même entre 2 et 8 unités du pH (Odd, 1988, 1994). Alors que dans la levure de gemación, est bien documentée accumulation intracellulaire de disacárdido pas réducteur de tréhalose (D - glucopiranosil - D - glucopiranosido), les informations disponibles à C.albicans est plus rare (Thevelein, 1996, François et coll., 1997; Argà ¼ Elles, 2000). Le tréhalose synthèse se produit principalement dans des conditions de l'absence de croissance (phase stationnaire ou suppression brutale des nutriments), agissant principalement comme un facteur de résistance, l'augmentation de la protection et de la stabilité dans une variété de conditions de nutrition cellulaire et le stress environnemental (jeûne nutritionnel choc thermique ou osmotique Processus d'oxydation et de la congélation ou le séchage). Dans les champignons et levures, de l'hydrolyse des physiologiques tréhalose est presque exclusivement confiées à l'enzyme trehalasa, desdoble le tréhalose en deux composantes: 2 molécules de glucose. On sait l'existence de deux trehalasas avec différents localisation subcellulaire (cytosolique et vacuolaire ou à l'extérieur selon les espèces), et les paramètres cinétiques (neutrona et de l'acide) (Thevelein; 1996; Nwaka et Holzer, 1998; Argà ¼ elles, 2000). C.albicans atteint à l'heure actuelle une grande importance clinique, car le nombre de candiddiasis a augmenté de façon spectaculaire en raison d'une part au nombre croissant de pacietnes inmunocompreometidos cas de malades du sida, traités avec des thérapies de lutte contre le cancer, les greffés, les nourrissons et les Les personnes âgées. En outre, la multiplication des souches résistantes est le résultat de l'utilisation (abusive) d'antibiotiques et d'agents chimiothérapeutiques. Alors apparaissent très souvent chroniques candidose orale, qui est difficile à régler, car ils sont souvent produites dans les patients affaiblis, qui s'est répandue comme un foyer infectieux viscérale à d'autres organes. C.albicans est aussi un modèle de système de recherche pour leur capacité de se comporter comme un champignon dimórfico, c'est-à-dire l'existence de deux façons: en tant que cellule levaduriformes (blastocoidios) et les structures miceliares (hyphae et pseudohifas). Il a été démontré qu'il existe une corrélation directe entre le processus de transition morphologique levadura - micelio et à l'acquisition de la pathogénicité pendant la colonisation de l'hôte de tissus (Odds, 1988, 19974; Kà ¶ hler et coll., 1996; Lo et coll. , 1997). La transition morphologique levadura - micelio est un processus complexe dans lequel intevienen divers facteurs externes qui produisent des signaux de déclencher l'changements morphologiques (Brown et Gow, 1999; Ernst, 2000). Les éléments de preuve recueillis sur la mobilisation de tréhalose, comme une exigence de l'énergie nécessaire pour un tel changement (Sullivan et coll. 1983; Ram et coll. 1984), cela a été l'un des principaux objectifs énoncés dans ce projet: l'analyse des fluctuations de Tréhalose durant le métabolisme changement dimórfico levadura - micelio de C.albicans induite spécifiquement induite par le sérum humain. À cette fin ont segudio deux approches expérimentales de base: 1 - Mesurer les niveaux de tréhalose ainsi que les variations de hydrolytique des enzymes et biosintéticas dans différentes conditions d'induction de progrma dimórfico. 2 - Analyser le comportement de la double mutantes tps1/tps1, déficients dans les deux allèles du gène codant la tehalosa - 6P synthétase et donc dans l'impossibilité d'accumuler tréhalose. Pris ensemble, nos observations sont compatibles avec l'idée que l'hydrolyse des disaccharide n'est pas une source d'énergie privilégiée pour la viabilité de ce dimorphisme dans la levure. Elle nous permet également de jeter laissées par lomenos - le trehalasa extérieurs jouent un rôle vital dans ce processus morphologie. Nous disque 8 utido suis 1869 pliamente cette proposition, qui ouvertement son désaccord avec la suggestion faite dans deux études antérieures (Sullivan et coll., 1983; Ram et coll., 1984), dont les auteurs suggèrent la participation active de l'hydrolase tréhalose dans la mobilisation. Nous avons approfondi dans d'autres aspects physiologiques sur le rôle du tréhalose dans ce levdura opportunistes. Les données fournies dans nos travaux confirment l'implication de la disaccharide dans les processus liés à la reprise de la croissance des cellules actives parmi frais fixes, ainsi que la rapidité de réponse métabolique à des changements brutaux dans les conditions environnementales (variations de température ou peut-être y compris sérum) C.albicans Est extrêmement sensible à la chaleur d'un traitement de choc sévère (52,5  ° C pendant 5 min), où il pousse exponentielle en milieu contenant du glucose. Plutôt ces cellules ont le phénomène conoci8do comme "réponse adaptative", qui leur permet d'atteindre un niveau de tolérance thermique, à condition que précédemment ont été incubées à une température doux (42 ° C). Cet effet protecteur, extrapole à d'autres types de stress, est due à l'activation de la trehalosa - 6P synthétase. Le double mutantes tps1/tps1 a été un outil utile génétiques dans nos études. Alors que blastoconidios des mutants tps1/tps1 sont compétentes pour saisir les ondes de programme, le niveau de leur miceliación a été inférieur à celui observé dans les cellules de type sauvage, recueillies au même stade de la croissance. Ce défaut pourrait être imputable à la profonde altération de la voie glucolítica dans ce mutante quand croissante sucre comme source de carbone, d'un défaut qui se manifeste comme dépendant de la température. En conséquence, la formation d'hyphae est pratiquement nulle dans les cellules tps1/tps1 exponentielle preincubadas au-dessus de la moyenne YP YP + + glucose ou de fructose, tandis que dans l'induction YP seul (extrait de levure 1% de peptone 2%) produit une fraction très similaires germinativos trompes. Aussi, le remplacement de glucose et fructose par galactos ou glycérol augmente le niveau de dimorphisme dans un diplôme équivalent, tandis que l'acétate favorise une légère baisse. La présence de l'éthanol est très dommageable pour le changement dimórfico notamment sous la forme de mutants. Au cours des travaux, nous faisons une surprenante observation, de l'extrême sensibilité des mutants tps1/tps1 d'oxydation (par exemple, le H2O2 spécifiquement). Par conséquent, nous avons consacré un chapitre à l'étude de ce processus. Les cellules hospedadoreas ont mécanismes de réponse estrás agissant de manière coordonnée (Estruch, 2000). L'un est le système dépendant de l'oxygène, et quand le champignon interagit avec la membrane de nuetróflilo stimule l'activation oxidasas, avec la réduction de O2 moléculaire anions superoxydes (O2). En vacuolas fagocíticas, O2 devient soit spontanément en raison de la faible pH ou catabólicamente par l'action de la superoxyde dismutase en peroxyde d'hydrogène (H2O2). Tant O2 comme H2O2 sont des agents de microbicides. Certaines études indiquent que dans Saccharomyces cerevisiae et d'un plus grand degré de C.albicans, si les cultures sont sujettes à de faibles concentrations d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) comme H2O2, OH et O2, soient protégés contre toute nouvelle exposition à des concentrations plus sont capables de Résister élevé. De midmo façon, quand Saccharomyces cerevisiae est soumise à une légère à l'exposition, acquiert la protection contre H2O2, (tolérance croisée), mais cette protection est plus faible lorsque le processus arrive en sens inverse. Jusqu'à maintenant, ces effets ne sont pas connus décrits dans C.albicans. Sur la base de notre travail, nous pouvons conclure que le tréhalose protège les cellules levaduriformes confrontés à de graves oxydatif expositions. Toutefois, l'accumulation de disaccharide ne semble pas nécessaire au cours de la réponse adaptative au stress oxydatif, un processus qui, selon nous, certes pertinente dans le cadre de l'infection in vivo par cet agent pathogène opportuniste. Par ailleurs, le rôle protecteur de tréhalose semble adhérer exclusivement à des agents oxydants, entraînant ainsi une diminution apparente par rapport à d'autres types de stress. En outre, nous proposons que la réponse à ROS comprend deux phases distinctes: une première défense immédiatement être induite directement par l'agent stressant et exige l'accumulation de tréhalose, tandis que la seconde se manifeste après un mètre d'attente avant d'être opérationnels et dépend uan itinéraire Encore non identifié. En l'absence de tréhalose synthèse de ce second mécanisme serait opérationnel après un contact préalable avec un faible de l'exposition et non létal l'agent stressant. L'absence d'expression des ARNm en présence de H2O2, en collaboration avec la effet négligeable de cicloheximida sur les entreprises Tsp1 nous amène à suggérer que l'activation de la synthétase tréhalose dépendants H2O2 est causée par un changement postraduccional de l'enzyme. Un des points saillants de ce rapport est le grand répertoire méthodologie utilisée, qui comprennent: déterminations classiques tests microbiologiques ezimáticos techniques conventionnelles electroforéticas procédures et de biologie moléculaire (analyse de l'ARN). À la direction de mon directeur, je fais un court séjour post-doctoral (un mois) dans le laboratoire dirigé par le docteur Carlos Gancedo, ce qui m'a permis non seulement plus rapides méthodes d'apprentissage non disponibles dans le département de Murcie, mais aussi d'obtenir de précieuses Résultats. Enfin, il importe de souligner que la validité de mon travail est soutenu par la publication de trois monographies spécialisées, dont la référence suivante. Elle est dans le montage, quatrième article scientifique.

Auteur: SANZ CARDONA EVA.
Année: 2005.
Université: ALICANTE [www.ua.es].
Lieu de préparation: FACULTAD DE CIENCIAS.

Résumé: La Ligue est une tensioctivo largement utilisé dans le nettoyage des détergents. Après son rôle, il devient usées, et, éventuellement, s'accumule le long de la biorresiduos généré avec le traitement de l'eau dans les stations d'épuration des eaux usées (WWTPs). La législation espagnole prévoit que ces biorresiduos être traités à l'usage prefentemente matériel, destacanco compostage comme un potentiel delas recommandé pour la réévaluation, la garantie sanitaraia et de l'environnement. La Ligue est une xenobiótico biodégradables mesófilas et conditions aérobies; pouvoir temófilas aérobie, propres à un processus de compostage des boues, on sait que la molécule réduit sensiblement sa concentration. Nous avons étudié l'effet de la chaleur et des facteurs nutritionnels dans les populations microbiennes résultant d'un processus d'échelle industrielle de compostage des boues urbaines WPP.

Auteur: GONZÁLEZ PÁRRAGA MARIA DEL PILAR.
Année: 2006.
Université: MURCIA [www.um.es].
Lieu de l'exposition: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Lieu de préparation: FACULTAD DE BIOLOGÍA- UNIVERSIDAD DE MURCIA.

Résumé: Au cours des dernières années, il ya eu un intérêt croissant pour la recherche sur la formation d'espèces d'oxygène Reactivas en réponse à diverses situations de stress environnemental. En parallèle, cela s'est passé à une augmentation des travaux sur la levure C. albicans, qui est considéré comme le plus opportuniste organisme affecte gravement la population humaine inmunocomprometida. Par conséquent, notre travail est principalement orientée vers l'analyse de la réponse de ce pathogène de la levure à une grave stress oxydatif et, plus précisément, la réponse des systèmes d'enzymes antioxydantes impliquées dans la protection contre le stress oxydatif cellulaire. C. Albicans appartient à un groupe de champignons ascomicetos, formant des hyphes et pseudohifas. Il manque cycle sexuel, en d'autres termes, un permis de diploïdes. Il s'agit d'une levure dimórfica pouvoir interconvertirse entre deux formes: Blastoconidios et Hifas, ce qui est très pratique pour utiliser comme modèle cellulaire dans des études sur les processus de développement. Le dimorphisme est un processus qui est génétiquement réglementés et même la formation du mycélium dépend de si oui ou non l'expression de certains gènes. Ce passage de la levure de mycélium est un facteur de virulence, et comment miceliar prédominantes dans le stade de la colonisation des tissus envahissantes. L'habitat naturel de Candida albicans est associée à la seule cause de l'homme avec des mycoses superficielles dans les individus en bonne santé restent les principaux agents pathogènes opportunistes dans immunodéprimées. Tous les organismes aérobies à la suite, que ce soit son propre métabolisme oxydatif des cellules ou de l'ajout d'acteurs extérieurs sont générés Reactivas Oxygen Species, à l'origine de la peroxydation des lipides et l'oxydation de protéines peut aussi causer des mutations arriver à l'ADN. L'une des plus grandes sources de Reactivas espèces d'oxygène dans les cellules de mammifères sont fagocíticas système immunitaire, en montrant que l'une des fonctions de ces espèces réactives, c'est la destruction des agents pathogènes. L'équilibre entre la production ESPÈCES REACTIVAS OXYGENE et de la capacité antioxydante de l'organisme, détermine l'apparition d'états de santé ou de maladie. Pour atténuer ces déclarations organismes ont mis au point un système complexe antioxydant, qui inclut non enzymatiques antioxydants comme les caroténoïdes, glutathion, ascorbate, et probablement tréhalose, y. ... Enzyme dont la catalase, MO, SOD glutathion peroxydase ou ... Parmi les enzymes antioxydantes de ne pas voir le tripéptido tiólico glutathion et le tréhalose disaccharide depuis une grande partie de cette thèse porte sur l'étude. Le GSH est utilisé pour une variété d'enzymes telles que la réduction de la puissance. Il est largement distribué dans les organismes aérobies trouvée dans les différents compartiments cellulaires. Parmi les fonctions du GSH noter: il est l'un des plus importants défenseurs de l'intégrité cellulaire contre le stress oxydatif et est impliquée dans le maintien de l'oxydoréduction environnement à l'intérieur des cellules. Une autre molécule ayant un potentiel antioxydant capacité est le tréhalose. Ce n'est pas un disaccharide réducteur, constitué de 2 molécules de glucose, qui sert de protecteur des cellules grâce à son rôle de stabilisateur prots et MBS. Prendre des mécanismes de différenciation et de développement. Le double mutant homozygote tps1/tps1 utilisé dans cette étude a été interrompue dans les 2 allèles d'un gène impliqué dans la synthèse de disaccharide (enzyme trehalosa-6P synthétase), et n'est donc pas en mesure d'accumuler de tréhalose. Parmi les systèmes d'enzymes antioxydantes nous avons étudiés: L'Catalasa, Glutathione Reductasa, Glucosa-6P-Deshidrogenasa, Superoxyde Dismutase et Glutathion Peroxidasa. En application de la présente 8 mangé avant a72 riormente, ce rapport a suggéré les objectifs suivants: 1.