PRODUITS NATURELS BIOTECHNOLOGIE

Auteur: MARTINEZ ARTEAGA BASELGA ROCIO.
Année: 2005.
Université: AUTÓNOMA DE MADRID [www.uam.es].
Lieu de l'exposition: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGIA CSIC.
Lieu de préparation: CENTRONACIONAL DE BIOTECNOLOGIA CSIC (UAM).

Résumé: Nous avons montré comment l'autobus dans la transcription de l'un des membres du groupe dcw (ftsZ) provoque des effets physiologiques: en plus de ne pas diviser, les cellules perdent leur viabilité. FtsZ est une protéine essentielle pour la division en Escherichia coli. L'absence de cette protéine mène à la filamentation, et les cellules de croître mais sont incapables de se diviser. En l'absence de FtsZ, les filaments perdent leur viabilité dans un délai de deux heures. Viabilité est récupérée lorsque les niveaux de FtsZ sont restaurés dans les premières valeurs présentes dans la souche parentale. L'utilisation d'ensembles de gènes nous a permis d'analyser le schéma général de l'expression des gènes dans trois conditions différentes; exprimant ftsZ, en l'absence de son intervention et de restauration. Niveaux de tránscrito groupe gènes ribosomiques montrent une forte baisse après l'arrêt de l'expression des gènes ftsZ et pendant la période de rétablissement ne sont pas récupérés. Lors de la restauration de l'expression des gènes ftsZ, ajouter des couches de tránscrito de gènes en réponse à des dommages à l'ADN et des gènes impliqués dans le métabolisme biosintético (anabolismo nucléotides, et le métabolisme des acides aminés centrale intermédiaire). Pour valider les résultats des ensembles de gènes ont été quantifiés niveaux tránscrito certains gènes pertinentes (par exemple, ftsZ, clpP, uvrC) par RT-PCR. Quantifier les niveaux tránscrito de tels gènes largement corroboré les résultats obtenus en utilisant des ensembles de gènes. La réponse transcriptionnelle observée suggère que les mécanismes possibles de la cellule prend de s'adapter à vivre en l'absence de division et de la façon dont ils peuvent influer sur la viabilité des actions de la dilution des cultures. Une fois convaincu que l'arrêt de la division provoque une réponse dans la transcription globale, nous avons étudié l'effet inverse, c'est-à-dire si les changements de conditions physiologiques produire un effet sur les niveaux de tránscrito groupe dcw, le plus grand groupe de gènes de la division et la synthèse de Peptidoglicano. Nous avons analysé les niveaux de tránscrito de gènes groupe dcw par RT-PCR de vérifier si les conditions physiologiques qui affectent l'expression de ces gènes. L'expression des gènes dans le groupe dcw est affecté par des conditions physiologiques, de sorte que le chemin de croissance exponentielle des cultures, est plus élevé parmi les riches parmi les pauvres. Ces résultats montrent que la vitesse de croissance produit un effet sur les niveaux de tránscrito groupe dcw.

Auteur: PALOMINO DEL CASTILLO CARMEN.
Année: 2005.
Université: AUTÓNOMA DE MADRID [www.uam.es].
Lieu de l'exposition: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA - CSIC.
Lieu de préparation: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA.

Résumé: Streptomyces lividans est une bactérie Gram positif qui sécrète de grandes quantités d'enzymes extracellulaires (Gilbert et coll., 1995). Cette bactérie a été utilisée comme système hôte pour la production de protéines recombinantes (Gilbert et coll., 1995), en revanche, à la fois la réalisation et l'amélioration de la production de ces protéines, une application industrielle, il nécessite une étude détaillée et d'identifier les goulets d'étranglement Les mécanismes impliqués dans la sécrétion de protéines extracellulaires en Strptomyces. Le mécanisme de portée générale du transport des protéines (s), qui commence par la reconnaissance et l'interaction avec les mécanismes intracellulaires séquences aminoterminales de sécrétion de protéines. Deux grands itinéraires ont été décrites dans diverses bactéries, d'une part, le mécanisme grâce à la médiation de SecA / B conduit à la sécrétion de protéines de la membrane forme postraducional (Beck et coll., 2000) et d'autre part, le mécanisme grâce à la médiation de la machinerie SRP, Formé par Ffh et scRNA et le récepteur FtsY qui dirigent les protéines de la membrane, au début de sa synthèse pour la translocation à travers la membrane du canal ou translocón, beaucoup de ces protéines membranaires étant intégrante comme dans le cas de E. coli (Dalvey et Chan, 2005 ). Nous n'avons trouvé aucun gène des homologues SecB dans Streptomyces lividans, mais ils sont présents, les gènes de la machinerie SRP, ffh, scRNA et ftsY (Palacín et coll., 2003). Ffh et scRNA constituent le SRP de S.lividans (Palación et coll., 2003). Avec ce travail, nous avons rencontré un tout formé par Ffh, FtsY et la sécrétion de protéines modèle, alpha amilasa et agarasa, dans le cytoplasme de la cellule mutante pour pepetidasa signaux majorité (Y62) (Palomino et Mellado, 2005), où le modèle de la Sécrétion est diminuée (Palación et coll., 2002), indiquant que le SRP est impliquée dans le mécanisme de sécrétion de cette bactérie. En outre, il a été constaté que les mutants Y62 a une incidence sur les niveaux de Ffh et FtsY dans la membrane, les deux éléments sont de plus en plus, se trouvant sous la forme de ocmplejos consistant Ffh, FtsY et preproteína pre-alpha l'amylase. Grâce à la miscroscopía d'immunofluorescence, nous avons vu l'emplacement de la SRP composants distribués aux différents sites de l'hyphae des mutants Y62 avant de la souche sauvage disséminés. Cette situation rappelle à l'emplacement microscopiques spécifiques translocón couplé avec GFP. Il a été décrit un phénomène d'accumulation des intermédiaires formés par Ffh, votre récepteur et preproteínas, dans la membrane du réticulum endoplasmique de cellules eucaryotes lorsqu'il n'ya pas transolocón disponibles (chant et le chou., 2000). Une situation similaire pourrait survenir dans S.lividans en l'absence de peptidasa signal de la majorité, où le traitement se dirigeant peptidique peut conduire à une inefficacité temporaire bloc dans le translocón. Enfin, Ffh et FtsY couplé avec pre-alpha amylase, formant un complexe de la membrane sont également associés à ATPase membranaire SecA, indiquant que les protéines sont transportées à la membrane par SRP nécessaires à l'action de SecA pour la translocation.